Измерение концентрации липидов крови: холестерин, фосфолипиды, триглицериды

Риск развития сосудистых заболеваний сердца, мозга и других органов оценивается по содержанию в крови общего холестерина, холестерина в структуре ЛПНП и ЛПВП, а также триглицеридов и фосфолипидов. Повышение уровней липидов крови, особенно холестерина липопротеинов низкой плотности, ассоциируется со всеми подтипами ишемического инсульта. Соотношение уровней и концентрации трех основных составляющих липидов крови человека - холестерина, фосфолипидов и триглицеридов - используются для диагностики и определения риска развития сосудистых заболеваний.

Существуют ферментативные системы (коммерческие тест-системы), позволяющие определить концентрацию холестерина, фосфолипидов и триглицеридов в крови человека. В основе метода ферментативного определения концентрации липидов лежат специфические взаимодействия двух типов ферментов - эстеразы и оксидазы - со своим субстратом, то есть веществом, относящимся к специфическому классу липидов. В случае, например, метода определения концентрации холестерина - это холестерол-эстераза, гидролизующая сложные эфиры холестерина, и холестерол-оксидаза, окисляющая образовавшийся в предыдущей реакции холестерин с образованием в качестве одного из продуктов реакции пероксид водорода.

Количество образовавшегося при работе системы ферментативного определения концентрации липидов пероксида водорода (перекись) пропорционально содержанию определяемого липидного компанента крови (холестерина, фосфолипида или триглицерида). Конечной реакцией тест-системы такого рода является взаимодействие пероксида водорода с 4-аминофеназоном и фенолом с образованием 4-(p-бенозохинон-моноимино)-феназона, эффективно поглащающего свет с длиной волны 500 нм. Фотометрическая абсорбция, измереная при 500 нм, отражает содержание холестерина, фосфолипидов или триглицеридов крови (в зависимости от использованой тест-системы) и легко может быть переведена в значения концентрации или молярной концентрации.

На рисунке представлены спектры, полученые при измерении фотометрической абсорбции в системах определения концентрации липидов крови, максимум поглащения 500 нм
Оптическая плотность, измереная при 500 нм, отражает концентрацию определяемого липидного компанента.
Зеленая линия - измерение концентрации фосфолипидов (270 мг/дл), красная - холестерина (160 мг/дл), голубая - триглицеридов (100 мг/дл)
Спектр поглощения получен как результат автоматического усреднения 100 измерений продолжительностью по 100 мс. Кювета с длиной оптического пути 10 мм, объем раствор - 1 мл
Определение концентрации холестерина и других лиидов крови можно проводить в кюветах объемом 200 мкл (длина оптического пути 1 мм) или 1000 мкл (длина оптического пути 10 мм)
Возможно построение отчетных бланков с графиками спектра поглощения и значениями поглощения при определенной длине волны для 12 образцов на одном бланке
Значение концентрации может быть вычислено и выведено на экран
Значения полного спектра поглощения могут быть конвертированы в формат MS Exel